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Message  claude44 Lun 26 Oct 2015 - 21:10

Depuis la première mise en route de ma hotte, j’ai des problèmes de contamination de mes flacons avec une bactérie de couleur blanche qui se développe dans les 48 heures du repiquage. Je n’arrive pas à déterminer son origine ni à l’éradiquer. Curieusement les semis faits en petits pots de bébé ne sont pas atteints ; les premiers repiquages de protocormes, faits il y a 3 jours, ne semblent pas non plus contaminés. Par contre, tous les derniers repiquages (plantes bien développées) que j’ai faits jusqu’à présent le sont. Par contre je n’ai aucune contamination par des champignons.
Est-ce un problème :
De mauvaise conception de la hotte ?
De mauvaise manipulation ?
Un autre problème ?
Je tourne en rond sans trouver la solution. Quelqu’un peut-il m’aider ?
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Message  gg68 Mar 27 Oct 2015 - 9:33

Les bactéries , de ma propre expérience, c'est plus un problème de "propreté" que de hotte.
Toi, tes instruments, le plan de travail de la hotte....tout ça est parfaitement propre quand tu bosses??

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Message  pacôme Mar 27 Oct 2015 - 12:47

tout à fait d'accord avec Gilles, les bactéries/levures voyagent rarement par les poussières contrairement aux moisissures.
si ce ne sont que les grosses plantules (toutes du même flacon mère, ou du même lot/espèce?) qui développent une contamination de ce genre, ou bien elles sont elles mêmes contaminées, mais discrètement, et c'est le passage sur un milieu frais au repiquage qui réveille le contaminant, ou bien c'est l'outil (pincettes) utilisé qui est mal stérilisé.
Ce genre de bactérie/levure blanchâtre, qui dégage une odeur pas très sympa type vieille transpiration, vient probablement de la peau. Je me demande si ça ne serait pas Candida albicans ou Escherischia coli, faudrait regarder au microscope une fois pour voir...

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Message  claude44 Mar 27 Oct 2015 - 16:24

Merci pour vos réponses, je préfère que le problème soit lié aux manipulations plutôt qu'à la construction de la hotte.

Je viens de regarder les bocaux desquels ont été extraites les plantules à repiquer (Odontoglossum pulchellum, zygopetalum microphytum et plusieurs espèces de laelias rupicoles); aucune trace de contamination par une bactérie n'est apparente, mais peut-être est-elle quand même présente à un stade où elle n'est pas encore visible ? Ce peut-être l'explication de ces contaminations à répétition où tous les flacons sont contaminés, à moins que ce ne soit l'introduction sous la hotte d'un des flacons contenant les plantules à repiquer qui n'en soit la cause (je ne les désinfecte pas toujours avant leur introduction).

Lors des manipulations, j'essaie de prendre le maximum de précautions pour ne pas provoquer de contaminations. Je porte des gants en latex et une blouse par-dessus mes vêtements;  la surface de travail est préalablement désinfectée à l'eau de javel pure, à l'alcool à 70° ou à l'hypochlorite et les instruments (presselles et spatules) sont désinfectés à l'hypochlorite ou à l'alcool à 70°.
Lorsque je travaillais à la flamme je n'avais pas autant de contaminations et lorsqu'il y en avait, elles étaient en général plus variées (champignons de différentes formes et couleurs, bactéries blanches, jaunes ou roses....)  Very Happy
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Message  paul72 Mar 27 Oct 2015 - 18:13

Claude, je peux t'assurer que la désinfection des outils à l'alcool 70° seule est insuffisante, idem pour un simple passage à l'hypochlorite. garantie de contamination. Donc Alcool + flamme, ou trempage dans l'hypochlorite pendant 10 minutes mini (c'est ce que je fais, avec 20g de poudre pour 1 litre d'eau) Wink

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Message  marine02 Mar 27 Oct 2015 - 19:58

Tes milieux utilisés etaient ils assez vieux, ou les as tu utilisé juste aprés la cuisson?

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Message  gg68 Mer 28 Oct 2015 - 9:39

Tout ce que tu introduis sous ta hotte, et les flacons à repiquer n'y font pas exception, doit au minimum être pulvérisé avec de l'alcool 70°, au moins sur la surface en contact avec ta hotte et pour ma part je les pulvérise bien partout!!

J'ai aussi pris l'habitude de poser à l'endroit où je bosse sous la hotte, c'est à dire là où je pose les flacons, de disposer un morceau de sopalin que je détrempe d'alcool à 70° et que je pulvérise régulièrement pour bien le garder détrempé!!

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Message  Camille-Phytorchid Sam 31 Oct 2015 - 7:58

a voir aussi autre chose, sous la hotte, ta main ne doit pas passer au dessus des boites, juste ton instrument bien désinfecté (Alcool + flamme)

est-ce que tu repique plusieurs boites différentes en une seule session? si oui, a ne pas faire car si tu a un champi ou autre dans une boite, tout le monde est contaminer donc désinfection systématique entre chaque boite


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Message  claude44 Sam 31 Oct 2015 - 18:59

Camille-Phytorchid a écrit:a voir aussi autre chose, sous la hotte, ta main ne doit pas passer au dessus des boites, juste ton instrument bien désinfecté (Alcool + flamme)

est-ce que tu  repique plusieurs boites différentes en une seule session? si oui, a ne pas faire car si tu a un champi ou autre dans une boite, tout le monde  est contaminer donc désinfection systématique entre chaque boite


Merci de t'intéresser à la question. Effectivement non seulement j'ai passé la main au-dessus des boîtes à repiquer mais en outre, j'ai repiqué plusieurs boites différentes en une seule session et comme si cela ne suffisait pas, il est probable que certaines des plantules à repiquer étaient infectées par la bactérie responsable de la contamination.
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Message  Camille-Phytorchid Sam 31 Oct 2015 - 21:01

Alors pour avoir eu aussi ce probleme, parce qu'on a tous débuter un jour, la regle d'or surtout c'est de ne pas etre pressé. Tu dois repiquer? tu prends ton récipient et tu ne fais qu'une partie, pas tout. Toujours étaler au maximum son travail pour avoir le temps de mettre tout en quarantaine et etre sur sur résultat.

jamais la main au dessus (de partie peau) au dessus des flacons ouverts, bosser a contre "vent" et sterilisation syste entre chaque flacon.

aller tu devrais t'en sortir :)

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Message  septpat Dim 1 Nov 2015 - 2:19

oui c'est vraiment chirurgical mais le travail du poisson est rigoureux... et ça fait de belle plantounes merci

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Message  Camille-Phytorchid Dim 1 Nov 2015 - 8:44

et ouai! Yes

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Message  Xeran Dim 1 Nov 2015 - 9:30

Perso pour mes instruments, ils trempent dans un pot sous ma hotte avec 1/2 javel et eau.
Et j'ai une flamme sous ma hotte ou je passe encore mon instruments juste avant de l'utiliser.
Et mon plan de travail est nettoyé à l'eau de javel et un petit puch de javel sur les pots avant des les ouvrir.
En général si j'ai une contamination c'est souvent du à une conta dormante dans le pot d'avant qui ce réveille au contacte de la nouvelle gélose plus riche.

Attention à l'eau de javel c'est pas très bon pour la santé donc je travail avec un bon masque pour éviter les vapeurs de l'eau de javel.

En espérant que cela puisse t'aider.

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Message  paul72 Dim 1 Nov 2015 - 9:57

Je fais comme Renaud, la flamme en moins. Mais en plus du masque, j'ai la tête qui n'est pas dans la hotte mais au-dessus. Je porte des gants, qui sont nettoyés à la javel aussi avant de manipuler. Et les flacons à manipuler plutôt vers le milieu ou le fond de la hotte, les mains en avant pour être derrière le flux d'air et donc repousser d'éventuels contaminants loin des flacons à repiquer. Eviter de passer la main au-dessus d'un flacon ouvert... Siffleur

et en effet, restériliser son outil de préférence entre CHAQUE flacon

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Message  Xeran Dim 1 Nov 2015 - 10:02

Moi aussi, je porte aussi des gants que je frotte à l'eau de javel .

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Message  gg68 Dim 1 Nov 2015 - 10:31

Pas de gants, pas de masques, éventuellement une blouse et surtout pas de javel...trop agressif à mon goût...alcool à 70° dans un pulvérisateur et tout roule très bien depuis des années!!

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Message  Xeran Dim 1 Nov 2015 - 10:47

gg68 a écrit:Pas de gants, pas de masques, éventuellement une blouse et surtout pas de javel...trop agressif à mon goût...alcool à 70° dans un pulvérisateur et tout roule très bien depuis des années!!

Il y a déjà un bon moment que je me dis que je vais essayer alcool à 70°, c'est effectivement moins nocif.

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Message  marine02 Dim 1 Nov 2015 - 11:41

Pour moi nettoyage des parois de la hotte à l'alcool, puis bombe anti bacterienne. Je travaille main nues, nettoyage des mains à l'alcool puis gel antibactérien.
nettoyage de chaque boite inserée dans la hotte avec compresse plus alcool.
Dans l'ensemble je trouve ça moins contraignant que la glovebox surtout en temps et mes boites sont plus belles (parce que je vois mieux).
je peux repiquer bien sur, plusieurs flacons en une session à condition de changer d'instrument. Je n'utilise pas de flamme sous la hotte.
Pour le moment, je suis satisfaite.

Si une boite est dejà contaminée avant repiquage, de toute façon, toutes les précautions du monde seront inutiles.

Comme cette belle rose

Demande d'aide IMG_4870
contamination survenue une semaine aprés la préparation des milieux sans repiquages bien sur. (boite deformée)

La contamination blanche dont tu parles je l'ai dejà eu dans ces conditions, flacons mal stérilisés ou mal fermé.

Pour ça j'attends au minimum entre 7 et 15 jours pour commencer à utiliser mes milieux.
C'est pour moi la première des précautions du semeur. il faut dejà eliminer cette cause, ensuite on peut se pencher sur la façon de semer ou repiquer sous hotte. Wink

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