Besoin d'aide

Stérilisation du milieu de culture puis répartition du milieu sous la hotte. 1er essai catastrophique, 85 à 90% des flacons plastiques anciens, stérilisés à la cocotte minute,ont développés en surface du milieu de culture une bactérie (liquide blanchâtre et gluant) dans les 5 jours. alors que parmi les récipients neufs seuls quelques flacons ont été victimes de cette bactérie.
Est-ce un défaut de stérilisation ou une mauvaise manipulation qui a causé ce problème ?
Il est vrai que j'ai empilés les anciens flacons dans la cocotte.
Comment faites vous pour stériliser correctement vos récipients de culture usagés ?

D'autre part, j'utilise des pots plastiques alimentaires de vente à emporter, faut-t-il percer les couvercles et obturer le trou avec du coton cardé comme je fais pour les récipients en verre ou peut-on laisser les couvercle tel quel ?

j'ai eu les mêmes soucis avec mes Microbox lorsque je les réutilisais.
Du coup j'évite de trop emboiter les boites (maximum 3) pour que la chaleur diffuse bien et je les laisse 1 heure lorsque le sifflet tourne. Depuis, plus de contaminations.

Et bien moi je réutilise aussi les Microbox, et je les empile par 11 (+ 11 couvercles) dans la cocotte-pression. J'ai parfois un taux anormal de contamination sur les flacons remplis de milieu avant repiquage, mais ça ne dépasse pas 5%...
Attention, très important de bien purger la casserole de son air avant de commencer à la mettre sous pression (laisser souffler abondamment, chauffage à fond, pendant 2-3 minutes). Sinon, même avec la bonne pression, la température atteinte est insuffisante. Je laisse tourner 25 minutes.
Je pense que j'ai le plus de "précontaminations" lorsque les flacons usagés ont été nettoyés il y a longtemps et sont bien secs. Lorsqu'ils sont fraichement nettoyés, et donc encore humides lorsque j'empile, ça fonctionne mieux.
Bien sur, la baisse de pression de la cocotte doit se faire sous la hotte, sous peine d'aspirer de l'air "contaminé" dans la casserole, et dans les flacons.

je laisse toujours tomber la pression de la cocotte hors de la hotte.
La cocotte étant en surpression, il n'y a pas d'air ambiant qui y pénètre, donc pas de risque de contamination

Merci à vous deux. Je viens de tenter de stériliser au four (oui, vous avez bien lu) des flacons plastiques vides avec leur couvercle. Thermostat réglé à 125°, durée 30 minutes.
Rien n'a fondu, mais je ne sais pas si la stérilisation est efficace. Qu'en pensez-vous ?
Si ça marche, cela me permet de stériliser d'un coup une quinzaine, voir une vingtaine de flacons vide.

Moi ne sachant pas mettre ma cocotte sous la hotte (trop petite) je stérilise mes pots avec le milieu dedans.

Mais j'ai déjà eu une fois comme toi un liquide visqueux et je ne sais pour quoi .

claude44 a écrit:Merci à vous deux. Je viens de tenter de stériliser au four (oui, vous avez bien lu) des flacons plastiques vides avec leur couvercle. Thermostat réglé à 125°, durée 30 minutes.
Rien n'a fondu, mais je ne sais pas si la stérilisation est efficace. Qu'en pensez-vous ?
Si ça marche, cela me permet de stériliser d'un coup une quinzaine, voir une vingtaine de flacons vide.

je ne pense pas que cela marche. C'est la vapeur d'eau sèche d'une cocotte ou autoclave qui a une action stérilisante. Dans un four classique tu a juste de la chaleur.

cyp670 a écrit:je laisse toujours tomber la pression de la cocotte hors de la hotte.
La cocotte étant en surpression, il n'y a pas d'air ambiant qui y pénètre, donc pas de risque de contamination  

oui oui mais je parlais du moment où la pression est totalement redescendue. A ce moment là, on a tout le volume interne qui est occupé par de la vapeur d'eau, qui va commencer à se condenser en tombant sous les 100°C. Et le vide, il va etre comblé par l'air ambiant ,en tout cas sur mon modèle, avec soupape rotative. Maintenant, est ce que dans la pratique ça pose réellement un problème... ça dépend de la "propreté" de l'air, de la dose de spores de moisissures et autres en suspension. Ici, j'ai intérêt à faire gaffe, je suis pas une fée du logis ;-)

cyp670 a écrit:je ne pense pas que cela marche. C'est la vapeur d'eau sèche d'une cocotte ou autoclave qui a une action stérilisante. Dans un four classique tu a juste de la chaleur.

Ce n'est pas que cela ne fonctionne pas, mais je cite :

En milieu saturé d'humidité et sous pression, la stérilisation s'opère à des températures inférieures à celles qui sont nécessaires en milieu sec.

Les germes sont plus difficiles à tuer dans une atmosphère sèche (150°C durant 3 H ou 170°C durant 1 H) alors que dans une atmosphère humide, les temps de stérilisation sont beaucoup plus courts.

Dans un four (qui correspond au vieux Poupinel utilisé en Biologie), rien n'empêche de rajouter de l'eau dans le lèchefrite et il faut aussi faire circuler l'air, et donc en théorie, il faudrait filtrer l'air entrant.

Claude d'après ce que j'ai relu, ton "temps de cuisson" semble court.

Je n'y connais rien en CIV mais sensiblement plus en Microbiologie.

eorchids a écrit:
Dans un four (qui correspond au vieux Poupinel utilisé en Biologie), rien n'empêche de rajouter de l'eau dans le lèchefrite et il faut aussi faire circuler l'air, et donc en théorie, il faudrait filtrer l'air entrant.

ça pourrait aider un peu, c'est mieux que rien. Mais tant qu'il y aura de l'eau qui s'évapore, la température aura du mal à dépasser les 100°C, c'est le souci dès qu'on est dans une enceinte qui ne permet pas une montée en pression.[/quote]

Discussions intéressantes, merci pour vos interventions.
J'ai donc renouvelé l'opération de stérilisation, mais cette fois-ci en cocotte minute et pendant 1 heure. J'ai empilé une dizaine de grandes barquettes avec un tesson de pot à l'intérieur pour permettre le passage de l'air et les couvercles ont été mis à côté. L'assemblage boîte/couvercle s'est fait sous hotte. On verra le résultat......
J'abandonne la stérilisation par le four. 125° ça passe, 150 ou 170° ça risque de fondre.....

pacôme a écrit:

eorchids a écrit:
Dans un four (qui correspond au vieux Poupinel utilisé en Biologie), rien n'empêche de rajouter de l'eau dans le lèchefrite et il faut aussi faire circuler l'air, et donc en théorie, il faudrait filtrer l'air entrant.

ça pourrait aider un peu, c'est mieux que rien. Mais tant qu'il y aura de l'eau qui s'évapore, la température aura du mal à dépasser les 100°C, c'est le souci dès qu'on est dans une enceinte qui ne permet pas une montée en pression.

Tu as raison.

claude44 a écrit:Discussions intéressantes, merci pour vos interventions.
J'ai donc renouvelé l'opération de stérilisation, mais cette fois-ci en cocotte minute et pendant 1 heure. J'ai empilé une dizaine de grandes barquettes avec un tesson de pot à l'intérieur pour permettre le passage de l'air et les couvercles ont été mis à côté. L'assemblage boîte/couvercle s'est fait sous hotte. On verra le résultat......
J'abandonne la stérilisation par le four. 125° ça passe, 150 ou 170° ça risque de fondre.....

c'est clair que le coup du tesson entre chaque flacon ça va bien aider au passage de la vapeur, ceci dit je n'ai jamais du y avoir recours. par contre, je glisse toujours une languette de papier alu replié entre le dernier flacon du haut de la pile, et les couvercles que je mets par dessus. sinon, le flacon du haut se referme parfois hermétiquement, et malgré les filtres des couvercles des microbox, lors du refroidissement de la cocotte, il "implose" et sort tout déformé.
intéressant aussi, en tout cas pour les couvercles (comme ceux des microbox) avec filtre, je mets toujours au dessus de la pile un couvercle sans filtre, qui recueille les gouttes d'eau de condensation. Sinon, les quelques premiers filtres sortent de la casserole complètement imbibés d'eau, ce qui est loin d'être idéal parait il.

je stérilise les pots et les couvercles des Microbox séparément. Pour éviter que les pots et couvercles ne baignent dans l'eau, je les met dans des sacs à déchet autoclave que je ne referme pas hermétiquement. les sacs sont réutilisables plusieurs fois et pour le moment cette technique me donne entière satisfaction.

Où vous procurez-vous des récipients de culture de qualité (micro box ou autres). Ceux que j'ai trouvés (boîtes plastiques pour vente à emporter) ont le couvercle qui ferme mal une fois autoclavés.

C'est à ça que sert le parafilm....
Sinon chez Combiness, en Belgique, pour les boites Microbox!!

gg68 a écrit:C'est à ça que sert le parafilm....
Sinon chez Combiness, en Belgique, pour les boites Microbox!!

Merci pour ces infos.

Seul hic de la Microbox, vendue par carton entier (440 boites pour la 280ml) + frais de port.
Mais n'importe comment, les acheter chez Combiness revient moins cher que de les acheter en France, chez Kalys par exemple. Autre inconvénient, après un certain temps, les filtres deviennent cassant, surtout sur les boites exposées à la lumière. Du coup, il faut racheter des boites ou des couvercles, vendu pour 500€ les 2500. Mais ils sont arrangent chez Combiness et ils les vendent également par 1250.
Malgré cela la Microbox reste un super produit, mais qui revient relativement cher à l'utilisation