megafoirage

Ce petit post pour vous faire partager ma désolation suite à une mauvaise manipulation... je n'ai pas de photos pour illustrer le résultat- on m'a piqué mon APN...
J'utilise toujours quelques ml d'eau stérile pour étaler dans les flacons les graines semées, ou les protocormes lorsque je fais le premier repiquage. J'utilise pour cela des pissettes (en plastique résistant) que je remplis d'eau avant de les stériliser à la casserole à pression. en 10 ans, j'ai bien du faire 20 fois la manip de restériliser le lot de 6 pissettes... et pour la deuxième fois en 10 ans, je me rends compte, bien trop tard, qu'une des pissettes (ou tout le lot) ont été mal stérilisées, et que tous les flacons que j'ai "mouillés" avec ce lot sont tous massivement contaminés! Ma chance cette fois est d'avoir eu un gros poil dans la main durant ces vacances de Noel, et de n'avoir reflaské et semé qu'une petite fraction de ce que je comptais faire..."seulement" une centaine de flacons remplis de liquide blanchâtre.
Bon, comme ce n'est pas une moisissure, mais plutôt une bactérie ou levure, qui ne "colle" pas tout le matériel dans une croûte compacte, j'ai tenté de récupérer les trucs les plus précieux, et de restériliser, mais je me serais bien passé de cette manip qui a duré presque une journée complète, et dont l'issue est toujours incertaine.

Moralité, j'arrête de restériliser les pissettes de 0.5 litres, qui sont en plastique (mauvais transfert de chaleur dans la casserole), et qui en plus peuvent sans doutes se recontaminer dans l'armoire où je les stocke lorsque les températures varient vite (par le bout du tuyau, que j'emballe dans un peu de papier alu mais ce n'est pas étanche).
j'en reviens à la méthode plus primitive qui avait donné de bons résultats avant, je stérilise l'eau dans des bocaux-bouteilles en verre avec capsule métallique, qui restent étanches tant qu'on ne les a pas réouverts, comme ça je fais 8 litres d'un coup, je peux laisser "cuire" deux heures pour être bien sur que la chaleur se soit répartie dans tout le volume des bouteilles, et je suis tranquille un an avec le stock! après, y a qu'à remplir d'eau stérile (sous la hotte) une pissette qui ne sort jamais de la hotte.

Comme une m...e ne vient jamais seule, je viens aussi de voir que le dernier lot de flacons de semis que j'ai coulés il y a une semaine, est à +/- 50% daubé. j'utilise, comme d'habitude, des petits raviers plastique à usage alimentaire, direct sortis de l'emballage du magasin. D'habitude, on peut considérer que 98% sont tellement propres qu'ils sont stériles, mais là, j'en ai 50% qui développent des points de contamination - moisissures cette fois. Et systématiquement en contact avec le fond du ravier, pas à la surface du milieu, donc ça vient bien de ce paquet-là de boîtes, qui a du traîner peut être plus longtemps qu'il n'aurait fallu sur le rayon du magasin, et qui n'était plus si propre et stérile que cela...je sens que je vais devoir les préstériliser à la casserole avant de les remplir de milieu dorénavant!

ceux qui sèment, ça vous arrive comme ça de foirer toute une journée de manip avec un truc qui aurait du être stérile, mais qui ne l'était pas?

Ah quelle merde !!!

Pour l'eau stérile, je le fais toujours dans des bouteilles autoclavables, mais 0.5 litre à la fois, que je n'ouvre que sous la hotte... et pour rincer mes graines, j'utilise des embouts de pipette automatique que je stérilise également... je n'ai pas de problème de conta avec ça...

J'ai déjà eu cette sorte de contamination sous forme de liquide blanchâtre... en tous cas j'ai remarqué qu'on ne pouvait pas laisser les semis avec ça, chez moi tout avait été cramé...

Mais dans le genre "bêtise", j'ai récemment préparé une série de boîtes pour le repiquage... et je me suis rendu compte après le coulage que j'avais oublié l'agar... certes c'est moins emmerdant que ce que tu as eu, mais ça montre qu'on fait vite des erreurs...

Et pour les boîtes contaminées... j'utilise pour mes semis des boîtes pétri non stérilisées, mais comme dans le cas de tes boîtes, elles sont tellement propres et bien emballées qu'elles sont quasi 100% stériles... mais rien n'empêche qu'on peut un jour tomber sur un lot mal préparé et là... crac...

oui, le liquide blanchâtre, vraiment pas bon pour les graines/protocormes... si on ne fait rien, c'est bon à jeter!

pour éviter les oublis - j'ai déjà eu un gros lots de flacons où j'avais repiqué plein de Lepanthes où j'ai remarqué avec le temps une croissance anormalement minable et des grosses carences minérales. J'ai donc du oublier une des solutions stock dans le mix, peut etre le fer chélaté, ou le nitrate de calcium...
pas de pertes, mais les seules plantes qui aient fini par grandit normalement sont celles que j'ai re repiquées sur d'autres boîtes.

J'utilise maintenant une "checklist" que j'imprime à chaque fois au départ d'un fichier excell, qui me calcule toutes les quantités des ingrédients que je dois utiliser, et je coche au fur et à mesure que j'ai ajouté ce qui est demandé. comme j'utilise des formules "maison" avec une dizaine au moins de liquides ou poudres individuels à mesurer, c'est devenu indispensable, surtout que j'ai de petits problèmes de mémoire à très court terme..; du genre à dire bonjour deux fois à la même personne à deux minutes d'intervalle le matin en arrivant au bureau ;-)

bon, toi pour les boites de petri, tu n'as sans doutes pas le choix, c'est normalement du polystyrène, donc pas question de les autoclaver une fois avant utilisation...les petits raviers "alimentaires" sont en polypropylène, donc j'ai encore l'option de les cuire une fois avant de mettre du milieu dedans.
je vais avoir une de ces factures de gaz moi....

Moi je passe tout à la cocotte, boites et milieu. Et tout de même il m'est arrivé d'avoir sur une série de boite de semis, 50% des boites contaminées (contamination rose) sans que je sache à quel moment j'ai commis une erreur.

Dernierement une série de moississures aussi sur les boites plus anciennes, ce qui montre que mes boites ne sont plus vraiment steriles à long termes. Mais c'est moins embettant quand les plantules sont de taille à sortir.

Pour l'eau sterile je prepare des petites boites avec juste de l'eau dedans, que je passe à la cocotte en même temps que les flasks.
Mais j'essaie toujours de faire des boites avec et sans eau (generalement j'ai assez d'eau naturellement dans mes boites passées à la cocotte) c'est juste pour les boites de milieu les plus vieilles un peu trop séches.

Effectivement quand on fait un semis rare, dans une boite qui se contamine de la sorte, ça énerve!!

pacôme a écrit:
bon, toi pour les boites de petri, tu n'as sans doutes pas le choix, c'est normalement du polystyrène, donc pas question de les autoclaver une fois avant utilisation...

Effectivement... et elles ne résistent pas vraiment bien à la chaleur... un milieu coulé trop chaud et hop, elles se déforment...

marine02 a écrit:Moi je passe tout à la cocotte, boites et milieu. Et tout de même il m'est arrivé d'avoir sur une série de boite de semis, 50% des boites contaminées (contamination rose) sans que je sache à quel moment j'ai commis une erreur.

Dernierement une série de moississures aussi sur les boites plus anciennes, ce qui montre que mes boites ne sont plus vraiment steriles à long termes. Mais c'est moins embettant quand les plantules sont de taille à sortir.

Pour l'eau sterile je prepare des petites boites avec juste de l'eau dedans, que je passe à la cocotte en même temps que les flasks.
Mais j'essaie toujours de faire des boites avec et sans eau (generalement j'ai assez d'eau naturellement dans mes boites passées à la cocotte) c'est juste pour les boites de milieu les plus vieilles un peu trop séches.

Effectivement quand on fait un semis rare, dans une boite  qui se contamine de la sorte, ça énerve!!

l'idée de stériliser l'eau dans plusieurs petites boîtes a un gros avantage, les petits volumes dispersés prennent plus vite la bonne température, que de grosses bouteilles pleines d'eau!

pour les semis, c'est finalement là que je suis le plus optimiste pour la récup des contaminations. la plupart étaient semé voici 10 jours, des graines assez "dures" (Neofinetia) qui auront certainement bien supporté le deuxième round de stérilisation que je leur ai imposé pour faire la récup. Par contre il y avait aussi un semis en capsule verte pas tout à fait mature, de Lepanthes terborchii... des années que j'essayais sans succès d'avoir une capsule de ce truc... et ça, c'est irrécupérable, les graines immatures sont très sensibles et auraient crâmé dans le peroxyde en même temps que les bactéries!

Hors sujet ou presque... tu sèmes que des graines immatures dans les Pleuro ?

orchidsworld a écrit:Hors sujet ou presque... tu sèmes que des graines immatures dans les Pleuro ?

non non ça m'arrive de semer mature, mais les capsules sont parfois tellement petites (Lepanthes...) et les graines très fines et fragiles, que ça m'arrive de perdre trop de graines, voire de les cramer, en semis "en sec", donc si j'ai la chance de voir la capsule quand je sens qu'elle commence à "tourner", je coupe, je sème en vert, et généralement tout va mieux comme ça!
maintenant, une grosse capsule de Restrepia ou d'Acianthera, je n'ai aps peur de la laisser mûrir à fond et semer en sec... mais comme je ne fais pratiquement plus que du Lepanthes, c'est régime en vert autant que possible!

Dommage pour ton pleuro!

Je ne sais pas si j'ai bien compris, tu recupéres les graines dans les boites contaminées que tu re desinfectes? OU tu repasses tes flasks à la cocotte

Pareil pour les petites capsules, je fais toujours en vert

marine02 a écrit:Dommage pour ton pleuro!

Je ne sais pas si j'ai bien compris, tu recupéres les graines dans les boites contaminées que tu re desinfectes? OU tu repasses tes flasks à la cocotte

Pareil pour les petites capsules, je fais toujours en vert

oui c'est cela, avec un jet d'eau de pissette je récupère les protocormes des boites contaminées, dans des tubes de 50cc, j'ajoute du peroxyde à 30% pour arriver à une concentration finale de 5%, et je laisse agir 20 à 40 minutes, je rince à l'eau stérile, et je remet dans une nouvelle boîte. Pareil pour les graines, sauf que là si leur résistance le permet, j'utilise d'abord du NaDCC (concentration finale 1 à 2%) pour "dissoudre" ces saloperies de bactéries, puis je rince, éventuellement je fais l'étape "peroxyde", et je ré étale sur d'autres boites de semis. c'est un peu long... mais avec certains croisements précieux, c'est mieux que de tout jeter!

dommage que je n'ai pas su ça avant

Arf!! merdoum quand tu nous tiens!

j'ai eu ma petite série une semaine en octobre où j'ai tenté (sur des repiquages ou j'avais beaucoup de plantes à répartir...) de changer un peu mes protocoles sous la hotte, en passant à la désinfection alcool des gants et du plan de travail. et en plus je n'ai pas stérilisé l'outil entre CHAQUE flacon comme je le fais habituellement. Eh ben ça a pas loupé: environ 40 flacons de repiquages foutus, et dans la série presque une dizaine de semis foirés (la plupart refaits après correctement).  Pas très grave mais ennuyeux de faire du boulot pour rien...
Note: il est tout à fait possible que les deux flacons mères incriminés étaient contaminés AVANT le repiquage, mais que je pouvais rien voir avec la densité de verdure dedans.


pour ce qui est de la stérilisation des flacons, je crois n'avoir jamais eu une contamination due a un défaut du flacon ou une mauvaise stérilisation, du moins l'an passé (j'utilise les microbox rectangulaires avec filtre). Et du moins jusqu'aux stades primitifs, car au dernier repiquage, les plantes transpirant plus, la condensation nocturne entraine assez souvent des contaminations mineures pour les plantes dès lors que les racines ont plongé dans le milieu.  C'est surtout grave après le premier repiquage des protocormes, et à fortiori après le semis!

paul72 a écrit:
Note: il est tout à fait possible que les deux flacons mères incriminés étaient contaminés AVANT le repiquage, mais que je pouvais rien voir avec la densité de verdure dedans.

ça, c'est même plus qu'une probabilité. les contaminations sont bcp plus discrètes quand elles n'ont pas la tronche à l'air à la surface du milieu, mais sont coincées dans un lit de plantules serrées...et le repiquage sur un milieu frais leur donne peut etre aussi un "coup de fouet"!

paul72 a écrit:


pour ce qui est de la stérilisation des flacons, je crois n'avoir jamais eu une contamination due a un défaut du flacon ou une mauvaise stérilisation, du moins l'an passé (j'utilise les microbox rectangulaires avec filtre). Et du moins jusqu'aux stades primitifs, car au dernier repiquage, les plantes transpirant plus, la condensation nocturne entraine assez souvent des contaminations mineures pour les plantes dès lors que les racines ont plongé dans le milieu.  

tu n'as jamais remis en doute l'étanchéité des microbox? je n'utilise plus que des rondes actuellement, mais sur le drrnier lot (de + de 2000 boites quand même) que j'ai reçu, j'ai examiné les filtres de tout près, car j'avais un taux vraiment inacceptable de contaminations "secondaires" ayant lieu plusieurs mois après le repiquage, voire un an ou deux plus tard. Et là, bardaf, 40 à 44% des couvercles ont un défaut au niveau de la soudure du filtre! des microtrous, pas toujours visibles à l'oeil nu, mais mis en évidence par le passage d'une goutte d'alcool coloré dans le filtre lorsqu'elle est déposée sur la soudure aux deux extrémités du filtre. parfois, c'est tellement visible quand on regarde de près, qu'il ne manque plus qu'un petit panneau "par ici les acariens"... J'ai renvoyé quelques dizaines de couvercles défectueux chez Combiness, et ils sont en train de voir au labo ce qu'ils peuvent faire pour remédier à ce problème...

j'ai rien remarqué ici, mais le lot que j'ai est assez ancien (5 ans je crois) alors peut-être les problèmes ont commencé après... j'ai plus l'impression dans mon cas que ce sont les ruissellements depuis les bords de l'ouverture (quand les plantes commencent à bien transpirer) qui transfèrent des saletés vers le milieu (le plus souvent, c'est sur les bords que j'ai des débuts de contamination.) En tout cas, même après des mois et des mois, je crois ne jamais avoir eu de contaminations sur des flacons non ouverts et non contaminés dès le départ. ça arrive toujours soit rapidement (15 jours maxi) soit après un ou deux repiquages.

cette tendance aux contaminations "tardives", je ne l'ai effectivement que depuis 2 ans... il y a du y avoir des changements dans la technique de fabrication, et ils n'avaient rien remarqué! il faut dire que l'essentiel de leurs clients sont des labos pros, chez lesquels les salles d'élevage des flacons sont presque aussi clean que les hottes à flux laminaires... je suis loin de pouvoir offrir cela à mes flacons, qui doivent donc impérativement être munis de barrières totales!

Il m'est déjà arrivé de foirer tous les semis faits dans une même journée, sans que je ne trouve d'explication autre que moi car la fois d'avant et la fois d'après j'ai utilisé des milieux préparés en même temps que ceux qui avaient foiré...
Pourtant je procède toujours de la même façon pour stériliser les graines, les rincer, me désinfecter, désinfecter la hotte, disposer les ustensiles, etc....incompréhensible...

Sinon pour ce voile blanc, bactérien ou levure, effectivement sur des semis ça ne pardonne pas, mais sur des plantes plus grosses ça ne gène plus en rien la croissance!!
Bon, je ne repique plus des flacons avec ce voile, mais si c'est les plantules sont assez grosses je les laisse grandir jusqu'à une taille où je pourrai les sortir.
J'ai deux barquettes d'Angraecum aloifolium dans ce cas, depuis près de 6 mois et ça continue de pousser....

Je pensais me lancer dans la civ de paphios, mais vos retours d'xp me font réfléchir...

C'est clair faut être un peu dingue!!

Parfois je me dis "mais qu'est ce que je me fais chier avec tout ça" et encore tu n'as là qu'un petit aperçu.

C'est ce que je tente souvent d'expliquer au débutant qui veulent semer. Quand on voit une flask toute faite, ça a l'air simple. Mais avant d'arriver à ça il faut tout de même beaucoup de foirage, de flask contaminé, de temps passé.

Bref on y trouve tout de même notre compte puisqu'on le fait. Mais ça n'est pas si facile que ça, en tout cas pour obtenir des plantes qui poussent bien aprés la sortie

Mais par contre ce que j'apprécie avec tous ces semeurs / semeuses, c'est le partage des succès, des erreurs, des expériences ! C'est en mettant tout ça en commun que l'on peut progresser :)

Je suis d'accord Francois, mais il faut le dire c'est tout de même trés récent. Lorsque la question s'est posé dans un autre "lieu" de créer une section specialisée Civ, j'avais été la seule à défendre l'idée!

Les temps ont changé, tant mieux. Pour tout ça j'aime bien partager, discuter, toute seule dans mon coin, c'etait triste et plus compliqué aussi.

Oui c'est vrai... on va dire que maintenant, ça devient "à la mode"... toi, Laurent, Gilles (j'en oublie), vous êtes des avant-gardistes

C'est pas marrant de faire les choses seul, sans partage justement.
Alors, les semeurs fous, continuez à faire avancer les choses !

Ca devient à la mode, certes. Mais c'est pas faute d'avoir cherché un semeur pro (sérieux et honnête), en France ou ailleurs...
Ca fait longtemps que je le dis, la sauvegarde des orchidées ne se fera pas sans les amateurs...

Il suffisait d'en parler....
Tous les semis (6 espèces) que j'avais fait lundi dernier ont foiré et je ne sais même pas pourquoi!!!!!